期刊专题

10.3969/j.issn.1002-2694.2001.02.004

截短的弓形虫P30基因在E.cOli中的高效表达及纯化条件的探索

引用
目的构建能在E.coli中高效表达的弓形虫主要表面抗原(P30)基因的重组表达质粒,并对纯化条件进行优化。方法 对已知的弓形虫P30基因序列进行部分取舍,用PCR技术从弓形虫ZS1株的基因组DNA中扩增出截短的P30基因片段,插入载体pET-30(a)中,转化大肠杆菌DH5 α,IPTG诱导表达,包涵体经洗涤、变性、复性及不同程度的浓缩后,进行SDSPAGE及免疫印迹分析。结果从弓形虫ZS1株基因组DNA中扩增出截短的P30基因片段,成功构建重组表达质粒pETP30;SDS-PAGE显示蛋白表达带的分子量约为31kD,表达量占菌体总蛋白的31.58%,经1M及2M尿素洗涤后,其纯度分别达63.42%及75.74%;免疫印迹显示,该纯化蛋白能被弓形虫病人阳性血清所识别,而且当浓缩至初始体积的1/3~1/6时,纯化蛋白与DNA免疫鼠血清的反应最强。结论成功构建重组质粒pET-P30,并以融合蛋白的形式进行了高效表达,经变性、复性后,该蛋白具有特异的免疫反应性,为弓形虫诊断试剂盒的研制打下基础。

弓形虫、P30、蛋白表达

17

R382.5(医学寄生虫学)

广东省科技攻关项目99M01203G

2004-01-08(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)

共5页

14-18

暂无封面信息
查看本期封面目录

中国人兽共患病杂志

1002-2694

35-1284/R

17

2001,17(2)

专业内容知识聚合服务平台

国家重点研发计划“现代服务业共性关键技术研发及应用示范”重点专项“4.8专业内容知识聚合服务技术研发与创新服务示范”

国家重点研发计划资助 课题编号:2019YFB1406304
National Key R&D Program of China Grant No. 2019YFB1406304

©天津万方数据有限公司 津ICP备20003920号-1

信息网络传播视听节目许可证 许可证号:0108284

网络出版服务许可证:(总)网出证(京)字096号

违法和不良信息举报电话:4000115888    举报邮箱:problem@wanfangdata.com.cn

举报专区:https://www.12377.cn/

客服邮箱:op@wanfangdata.com.cn