弓形虫表面抗原P22编码基因片段的克隆及序列测定

摘要：

目的　克隆弓形虫表面抗原P22编码基因片段并进行序列测定。方法　设计合成1对引物，采用PCR法扩增出P22目的　基因片段，以低熔点琼脂糖回收纯化，并以限制性内切酶BamH Ⅰ和Kpn Ⅰ双酶切后，插入质粒载体p5.6的多克隆位点，构建重组体p5./P22，并转化大肠杆菌DH5a，快速酚法初筛阳性重组子，并以PCR法与限制性酶切分析对阳性克隆进一步鉴定。被鉴定的重组子以双脱氧链终止法进行序列测定。结果　从弓形虫核酸提取物中扩增出约593bpDNA条带，与预期扩增片段大小相符，空白对照无特异性扩增条带；所构建p5./P22重组体阳性克隆经双酶切与PCR鉴定与预期结果　一致；序列测定的结果　确证了插入片段的正确性。结论　体外成功扩增、克隆了弓形虫表面抗原P22编码基因片段，并经序列分析所验证，为弓形虫P22表面抗原的表达以及弓形虫疫苗的制备作好铺垫。

关键词：弓形虫P22表面抗原基因克隆序列测定

所属期刊栏目：16

分类号：R382.5(医学寄生虫学)

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：62-64