期刊专题

10.3969/j.issn.1002-2694.2000.01.009

弓形虫P30基因MBP融合蛋白的表达

引用
目的构建弓形虫主要表面抗原P30基因的原核表达载体并在E.coli中表达。方法根据已发表的弓形虫P30基因序列,自行设计合成一对引物并在引物5'端分别引入限制性内切酶EcoRI、SalI酶切位点,用PCR技术从弓形虫RH株基因组DNA中扩增P30基因片段,插入pMALP2质粒转化大肠杆菌DH5a α感受态细胞,于氨苄LB培养平板上筛选阳性克隆,经过酶切及PCR扩增签定重组子。将阳性重组子经IPTG诱导表达,SDS-PAGE及免疫印迹分析。结果从弓形虫RH株DNA中扩增出976bp的P30基因,构建成功pMALP2~P30重组质粒;SDS-PAGE电泳及Western-blot显示MBP/P30融合蛋白条带的分子量约为77.5kD,减去MBP的分子量43kD,得出P30蛋白分子量为34.5kD,且能被弓形虫高免鼠血清识别。结论从弓形虫基因组DNA中获取P30基因,并成功构建pMALP2-P30重组质粒,诱导表达了P30的融合蛋白。为进一步P30蛋白的分离纯化及其对动物的免疫原性研究作好准备。

弓形虫、P30基因、融合、表达

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R382.5(医学寄生虫学)

山东省卫生厅资助项目

2004-01-08(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)

共3页

29-31

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中国人兽共患病杂志

1002-2694

35-1284/R

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2000,16(1)

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