粪便样本溶组织内阿米巴、蓝氏贾第鞭毛虫双重TaqMan实时荧光聚合酶链反应检测方法的建立

摘要：

目的 探讨同时检测溶组织内阿米巴和蓝氏贾第鞭毛虫的双重TaqMan实时荧光聚合酶链反应(real-time fluorescent polymerase chain reaction,RT-PCR)方法.方法 设计针对溶组织内阿米巴和蓝氏贾第鞭毛虫的引物对和探针,建立双重TaqMan RT-PCR的扩增体系,将PCR扩增产物序列导入pUC57质粒,测定方法的最低检测限,并通过临床粪便样本对该方法进行初步评价.结果 本研究建立的双重TaqMan RT-PCR法对溶组织内阿米巴最低检测限为31.6 copies/μL,蓝氏贾第鞭毛虫最低检测限为32.0 copies/μL.总共纳入212例临床粪便样本,3例溶组织内阿米巴镜检阳性患者样本PCR扩增结果均为阳性,209例溶组织内阿米巴镜检阴性的患者样本1例PCR扩增结果阳性,其余为阴性.8例蓝氏贾第鞭毛虫涂片镜检阳性样本PCR扩增结果均阳性,204例蓝氏贾第鞭毛虫镜检阴性患者样本中1例PCR扩增结果为阳性,其余为阴性.通过扩增产物测序和Blast分析确定了镜检阴性PCR阳性患者样本中扩增序列属于目标病原体,且临床症状以及实验室检查结果也支持该诊断.其他致腹泻病原体PCR扩增结果阴性,不存在交叉反应.结论 建立的双重TaqMan RT-PCR方法不仅可以检测出溶组织内阿米巴及蓝氏贾第鞭毛虫镜检阳性样本,还能检出两者镜检漏检的样本,敏感度高于镜检法.并且与其他腹泻病原体包括布氏嗜碘阿米巴、人芽囊原虫、邻单胞菌、气单胞菌、沙门氏菌、痢疾志贺菌菌株、球虫以及哈门氏内阿米巴不存在交叉反应,具有较好的特异性.

关键词：溶组织内阿米巴、蓝氏贾第鞭毛虫、TaqMan实时荧光聚合酶链反应

所属期刊栏目：23

分类号：R446.13(诊断学)

资助基金：四川省科技厅项目No.2016SZ0023

在线出版日期：2023-07-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：596-601,611