阿尼昂尼昂病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

摘要：

目的 建立阿尼昂尼昂病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法.方法 针对阿尼昂尼昂病毒nsP1基因设计特异性引物和探针,以珠海国际旅行卫生保健中心之前构建的MS2病毒样颗粒为标准品,采用一步法建立实时荧光定量RT-PCR检测方法,并对该方法的检测下限、特异性、精密度、抗干扰能力、符合率进行评价.结果 建立的阿尼昂尼昂病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法线性良好(线性方程Y=-3.746X+46.174,R2=0.988),检测下限为103copies/mL,低于之前文献报道的检测下限;能特异性地扩增阿尼昂尼昂病毒基因片段,而对其他相关病原体,包括同属于甲病毒属的基孔肯雅病毒、引起类似症状的登革病毒和马雅罗病毒、共用同一媒介宿主的疟原虫等无非特异性扩增;精密度良好,批内精密度测试时Ct值为32.92～35.40,变异系数CV为2.10％;批间精密度测试时Ct值为31.89～35.49,变异系数CV为3.41％;在存在溶血、脂血等干扰因素时Ct值与正常样本的Ct值差值分别为0.37、0.71,表明其能有效对抗溶血、脂血等干扰因素的影响;盲样检测时能检出4例阳性和12例阴性,同预期结果完全一致,阴阳性符合率可达100％.结论 本研究建立的检测方法,灵敏度高、特异性好、精密度高、抗干扰能力强,可为阿尼昂尼昂病毒检测提供可行的方法.

关键词：病毒样颗粒;阿尼昂尼昂病毒;RT-PCR

所属期刊栏目：21

分类号：R561(呼吸系及胸部疾病)

资助基金：海关总署科技计划项目No.2019HK141

在线出版日期：2021-06-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：422-425