EMA-qPCR检测活沙门菌方法研究

摘要：

目的 为解决荧光定量PCR(qPCR)方法不能区分死菌和活菌的问题,探索一种快速定量检测“活的”沙门菌的技术路线.方法 将不同浓度叠氮溴化乙锭(EMA)作用于不同浓度的死/活沙门菌后,用qPCR检测沙门菌Ct值,确定EMA的最优使用浓度.在混合菌量为106、105、104、103 CFU/mL,活菌比例为0％、10％、30％、50％、70％、100％条件下,确定EMA处理过的活菌+死菌,未加EMA的活菌+死菌,未加EMA的活菌+生理盐水三组菌的Ct值,研究EMA-qPCR法对死/活沙门菌的区分能力.结果 EMA浓度低于50 μg/mL,EMA处理活菌组与EMA未处理活菌组的Ct值差异无统计学意义.综合考虑,EMA最优使用浓度为10μg/mL.采用10 μg/mL EMA进行预处理,混合菌量为106、105、104、103CFU/mL时得出的结果一致:活菌比例为0％,≤50％,＞50％时,EMA处理过的活菌+死菌与未加EMA的活菌+死菌两组Ct值差异(ΔCt)分别为≥5,≥1,＜1.同时,除活菌比例0％外,其他活菌浓度下,EMA处理过的活菌+死菌与未加EMA的活菌+生理盐水两组Ct值无明显差异.结论 菌量为103～106 CFU/mL时,通过10 μg/mLEMA作用,EMA处理过样品与未加EMA处理样品的ACt值≥1,可考虑样品中沙门菌活菌比例≤50％.

关键词：叠氮溴化乙锭(EMA)、EMA最优使用浓度、荧光定量PCR(qPCR)、Ct值、沙门菌

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分类号：R378.2+2(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：深圳市“医疗卫生三名工程”引进高层次医学团队项目;深圳市科技创新委员会项目;深圳市南山区重点学科建设资助

在线出版日期：2020-05-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：219-222