人SR-BI基因表达抑制慢病毒载体构建及其稳定细胞株的筛选

摘要：

目的 建立SR-BI表达抑制的肝癌细胞系,以作为研究SR-BI基因突变对HCV感染性影响的细胞模型.方法 构建SR-BI短发夹状RNA(Short hairpin RNA,shRNA)慢病毒重组质粒Lv-SR-BI-shRNA,挑取克隆进行PCR扩增和序列测定;将阳性重组质粒与慢病毒辅助质粒共转染HEK2973T细胞,包装SR-BI shRNA慢病毒并进行病毒滴度测定.SR-BI shRNA慢病毒感染人肝癌细胞株Huh7和Huh7.5.1细胞,嘌呤霉素筛选,Real-time PCR和Western blot法检测SR-BI mRNA转录和蛋白表达.结果 测序结果证实Lv-SR-BI-shRNA慢病毒载体构建成功并获得HEK293T细胞中包装的慢病毒,Lv-SR-BI-shRNA重组慢病毒感染Huh7和Huh7.5.1细胞,感染组SR-BI mRNA转录降低,蛋白表达降低.结论 建立了SR-BI表达抑制的人肝癌细胞株Huh7-siSR-BI和Huh7.5.1-siSR-BI稳定细胞系.

关键词：人SR-BI、短发夹状RNA、肝癌细胞系、构建、筛选

所属期刊栏目：16

分类号：R378.21(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金No.31370196;973计划No.2013CB531601;军队基金No.BWS14J023,2012JS01

在线出版日期：2016-04-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：203-207