双歧杆菌表达肠致病性大肠埃希菌EspA蛋白的体外研究

摘要：

目的 构建肠致病性大肠埃希菌(Enteropathogenic E.coli,EPEC)EspA蛋白双歧杆菌表达重组菌株,并验证蛋白表达.方法 采用常规PCR扩增EspA片段,体外构建重组质粒pBAD-EspA,转化大肠杆菌BL21感受态细胞培养,挑取单克隆提取质粒,双酶切和PCR对重组质粒鉴定.pBAD-EspA电转化长双歧杆菌感受态细胞,挑取阳性克隆并PCR鉴定,经木聚糖诱导表达,蛋白质印迹试验(Western blot)分析验证EspA蛋自在双歧杆菌中的表达.结果 经酶切后琼脂糖凝胶电泳及测序结果证明pBAD-EspA重组质粒构建成功.pBAD-EspA重组质粒转化双歧杆菌后经阿拉伯糖诱导,在诱导表达不同时间点菌液沉淀均有良好的蛋白表达.结论 体外成功构建表达EPEC EspA蛋白的长双歧杆菌,为制备ESPA口服疫苗提供科学依据.

关键词：肠致病性大肠埃希菌、EspA基因、双歧杆菌、蛋白诱导表达

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分类号：R378.21(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金项目N0.81170370;深圳市科技创新委员会项目No.201202173,201203211

在线出版日期：2014-10-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：993-994,999