人巨细胞病毒UL32和UL44融合基因的表达及其抗原性分析

摘要：

目的 用聚合酶链式反应(PCR)扩增人巨细胞病毒UL32、UL44截短基因,构建pET-32a-UL32-UL44表达载体,转化宿菌大肠杆菌BL21 (DE3)进行表达,对目的蛋白进行纯化、标记HRP,用于检测IgM抗体.方法 根据Genebank中HCMV的pp150、pp52蛋白序列,利用Protean计算机软件分析其亲疏水性和抗原性,选取适合的区段,根据其对应的UL32、UL44基因核苷酸序列设计合成引物,PCR扩增目的基因序列,经测序证明无误之后,克隆pET-32a-UL32-UL44重组质粒,将重组质粒导入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,进行诱导表达,纯化目的蛋白,标记HRP,用ELISA捕获法对目的蛋白-HRP标记物的灵敏性和特异性等指标进行评价.结果 成功构建pET-32a-UL32-UL44重组质粒,导入在BL21(DE3)菌株中,经诱导后目的蛋白表达于上清中,经纯化、标记HRP,标记物用于ELISA捕获法能够准确、特异地检测HCMV血清标本,80份血清检测结果显示其灵敏度可达92.5％,特异性达97.5％.结论 HCMV基因工程重组蛋白具有较好的免疫活性,为研制以基因工程重组抗原代替传统全病毒抗原的HCMV检测试剂盒打下了基础.

关键词：人巨细胞病毒、截短基因、蛋白纯化、酶联免疫捕获法

所属期刊栏目：14

分类号：R373.14(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2014-05-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：267-270