痢疾杆菌GST-IpaH4.5载体构建及其在大肠杆菌中的表达

摘要：

目的 构建痢疾杆菌GST-IpaH4.5融合蛋白表达质粒,并在大肠杆菌(E.coli)中诱导表达.方法以痢疾杆菌福氏2a 301株全基因组为模板,PCR扩增痢疾杆菌ipaH4.5基因,在ipaH4.5的上游加上BamH I酶切位点,下游加上Xhol I酶切位点,将ipaH4.5基因定向插入质粒pGEX-4T-1中,构建原核表达质粒pGEX-IpaH4.5并转化E.coliDH5α,筛选阳性重组子,限制性内切酶切鉴定和DNA序列测定,DNA序列正确后提取质粒转化E.coli BL21,筛选阳性转化子,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达结果.结果 成功构建IpaH4.5原核表达质粒pGEx-IpaH4.5并表达出大小约86 000Mr的GST-IpaH4.5融合蛋白.结论 GST-IpaH4.5融合表达载体的构建,为进一步纯化IpaH4.5蛋白和研究其在痢疾杆菌致病机制中的作用奠定了基础.

关键词：痢疾杆菌、IpaH4.5、质粒、原核表达

所属期刊栏目：11

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2011-11-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：911-912,915