猪圆环病毒2型诱导 PK-15细胞产生 IFN-β的信号通路研究

摘要：

【目的】研究猪圆环病毒2型(porcine circovirus type2，PCV2)感染 PK-15细胞后调控β-干扰素（interferon-β，IFN-β）生成的信号通路，为猪圆环病毒病的发生机理和防治提供理论基础。【方法】将 PK-15细胞随机分成5组：对照组、PCV2组、BX795(TBK1/IKKε抑制剂)组、BAY 11-7082(NF-κB 抑制剂)组和 BX795+BAY 11-7082（混合抑制剂）组。 BX795组、BAY 11-7082组、BX795+BAY 11-7082组分别用0.5μmol BX795、5μmol BAY 11-7082、0.5μmol BX795+5μmol BAY 11-7082预先处理1 h，然后感染 PCV2。于感染后3、12、24、48和72 h收集细胞，提取 RNA。用荧光定量 PCR 检测 IFN-β、模式识别受体（TLR3、TLR9、RIG-1、MDA-5、DAI）、接头蛋白（TRIF、MyD88、Sting、MAVS、IRF3）的 mRNA 含量。【结果】PCV2感染 PK-15细胞后，IFN-β的 mRNA 含量在48、72 h 显著升高（P＜0.01），表明 PCV2感染可以诱导 PK-15细胞生成 IFN-β；TLR3的 mRNA 含量在48 h 显著升高（P＜0.01），TLR9的表达量在48、72 h 显著升高（P＜0.01）；TLR3和 TLR9下游的接头蛋白 MyD88和 TRIF的 mRNA 含量在48 h 显著升高（P＜0.01），表明 PCV2激活了 Toll 样受体介导的 NF-κB 信号途径；MDA-5的 mRNA含量在48、72 h 显著升高（P＜0.01），RIG-1的 mRNA 含量在72 h 显著升高（P＜0.01），MDA-5和 RIG-1下游的接头蛋白 MAVS、Sting、IRF3的 mRNA 含量在48 h 显著升高（P＜0.01），表明 PCV2激活了 RIG-1样受体介导的IRF3信号途径；DAI 的 mRNA 含量在48、72 h 显著升高（P＜0.01），表明 PCV2亦激活了 DNA 模式识别受体介导的IRF3信号途径；分别用 BX795和 BAY 11-7082抑制 IRF3和 NF-κB 介导的信号通路，结果显示 NF-κB 抑制剂组的IFN-β的 mRNA 含量与 PCV2组相比无显著性差异（P＞0.05），TBK1/IKKε抑制剂组的 IFN-β的 mRNA 含量与 PCV2组相比明显下降（P＜0.05），表明 PCV2诱导 IFN-β的产生主要由 IRF3信号途径调控。【结论】PCV2感染可以诱导 PK-15细胞中 IFN-β表达量的上调，其上调主要与 IRF3信号通路有关。

关键词：PCV2、PK-15 细胞、IFN-β、信号通路、接头蛋白

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分类号：S858.28;R392;R735.2

资助基金：国家自然科学基金;江苏省自然科学基金;中央高校基本科研业务费专项

在线出版日期：2016-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：2008-2016