拟南芥转录因子AtMYB73转录活性区域分析及互作蛋白的筛选

摘要：

【目的】确定拟南芥抗逆转录因子AtMYB73的转录活性区域并筛选获得与其互作的蛋白，为进一步阐明AtMYB73调控拟南芥抗逆的分子机制奠定基础。【方法】构建转录因子AtMYB73的酵母诱饵表达载体pAS1-AtMYB73，检测pAS1-AtMYB73的自激活性及其对酵母Y190的细胞毒性。克隆AtMYB73的N端区域（含有R2R3结构域）和C端区域（不含R2R3结构域），检测AtMYB73的N端和C端的转录激活活性，分析AtMYB73自激活结构域的位置。利用酵母双杂交技术，以AtMYB73为诱饵筛选拟南芥的cDNA文库，将阳性克隆进行鉴定、测序；利用TAIR数据库对筛选获得的AtMYB73的候选互作蛋白进行分析。构建AtMYB73和F12F1.4的酵母双杂交载体pGBDT7-AtMYB73和pGADT7-F12F1.4，通过酵母双杂交技术，对其互作关系进行分析。【结果】含pAS1-MYB73的酵母菌在不同浓度的3-AT的SD/-His/-Trp/、SD/-Ade/-Trp培养基上均能生长，表明AtMYB73具有较高的自激活活性。含pAS1-AtMYB73的酵母菌在SD/-Trp/Amp液体培养基中培养24 h的OD 600值大于0.8，表明诱饵载体对酵母Y190没有细胞毒性。成功构建了pAS1-AtMYB73-N和pAS1-AtMYB73-C载体，获得了含有pAS1-AtMYB73-N和pAS1-AtMYB73-C的酵母；含pAS1-AtMYB73-N的酵母在含X-a-gal的YPAD培养基上呈现无色，而含pAS1-AtMYB73-C的酵母则呈现蓝色，表明AtMYB73的C端有明显的自激活性，而N端没有自激活性。以AtMYB73为诱饵，筛选拟南芥的cDNA文库，获得了与光合作用、防御反应途径、抗逆等相关的8个蛋白。利用酵母双杂交技术，确定了MYB73与F12F1.4之间存在一定的互作。【结论】拟南芥抗逆转录因子AtMYB73具有较高的转录激活活性，其活性区域位于C端；以AtMYB73为诱饵，筛选获得了与光合作用、防御反应途径、抗逆等相关的8个AtMYB73的候选互作蛋白；利用酵母双杂交技术，确定了AtMYB73与F12F1.4之间的互作关系。

关键词：拟南芥、转录因子AtMYB73、转录活性、酵母双杂交、互作蛋白

分类号：Q939.5;Q784;R3

资助基金：国家自然科学基金;河北省自然科学基金;高等学校博士学科点专项科研基金

在线出版日期：2015-01-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：4724-4732