球孢白僵菌HsbA蛋白的原核表达及免疫定位

摘要：

[目的]明确虫生真菌球孢白僵菌（Beauveriabassiana）疏水表面结合蛋白HsbA（hydrophobic surface binding protein A）的致病过程。[方法]对HsbA进行克隆、亚克隆和原核表达，根据纯化后的蛋白制备多克隆抗体并进行抗原性分析，利用免疫电镜对HsbA蛋白进行定位观察。[结果]原核表达系统成功诱导了白僵菌的HsbA融合蛋白，制备多克隆抗体经Western杂交分析表明，该多抗能特异性识别目的蛋白。免疫电镜结果显示，HsbA蛋白在孢子和菌丝中呈随机分布。正常生长状态下，菌丝中的HsbA蛋白数量要明显多于孢子中被标记的数目，此外，孢子在侵染状态和正常生长状态下的HsbA蛋白数量也有显著差异，侵染状态下孢子的HsbA蛋白表达量更高，但菌丝在这2种状态下均呈现高表达。感染虫体中HsbA蛋白被标记的部位集中在体壁。[结论]原核表达实现了HsbA 蛋白的高效表达，且制备的多克隆抗体具有较好的免疫原性。此外，免疫定位表明 HsbA 蛋白与菌丝的生长有关，并在白僵菌致病过程中参与了吸附作用，其作用部位位于昆虫体壁。

关键词：球孢白僵菌、HsbA蛋白、原核表达、多克隆抗体、免疫电镜

分类号：S852.65;R392;S435.111.41

资助基金：现代农业产业技术体系;现代农业产业技术体系建设专项

在线出版日期：2013-12-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：4534-4541