含铁蛋白FAO1融合基因的衣藻核转化表达和分析

摘要：

”目的”fao1编码Candidacloacae中一种含铁辅基的长链脂肪醇氧化酶。通过构建该基因的衣藻核转化表达载体进行转化，根据表达蛋白的生物活性判断fao1能否充分利用衣藻叶绿体中的铁元素行使功能；同时也为需铁固氮酶基因的研究提供方向。”方法”通过PCR把PsaD信号肽、fao1、His-tag标签融合，连接到pDBle载体上；采用玻璃珠转化法，将重组子导入莱茵衣藻（CW15）中；经博来霉素筛选后，获得转基因植株。运用PCR和RT-PCR法检测了转化衣藻，并且用亲和层析柱纯化蛋白，同时进行FAO1活性检测。”结果”重组质粒测序完全正确；PCR和RT-PCR检测转化衣藻基因组DNA和RNA，扩增片段与预期相符；转化衣藻FAO1蛋白纯化洗脱液使ABTS（2,2′-联氨-双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二胺盐）底物反应变色。”结论”成功构建了信号肽、FAO1和His-tag融合基因的衣藻核转化表达载体，重组质粒已整合到莱茵衣藻基因组中，并成功转录，纯化的蛋白检测有活性。

关键词：长链脂肪醇氧化酶、信号肽、His-tag标签、衣藻核转化、RT-PCR

分类号：R39;R74

资助基金：国家科技部“973”项目2010CB126500;国家自然科学基金NSFC31070720

在线出版日期：2013-12-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：4515-4522