徐淮山羊SCD1基因的克隆和亚细胞定位研究及转基因小鼠的制备

摘要：

[目的]克隆徐淮山羊硬脂酰辅酶A脱氢酶1(SCD1)基因的cDNA并分析该基因生物信息学功能.通过EGFP融合蛋白在亚细胞水平定位该基因表达产物,研究该基因在异种动物体内表达情况,探索制备异种转基因动物的可能性及外源基因能否稳定遗传.[方法]采用RT-PCR方法从徐淮山羊脂肪组织中克隆SCD1基因cDNA,进行生物信息学分析,并构建含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的融合表达载体pEGFP-C1-SCD1.脂质体(LTX)介导基因转染NHI-3T3细胞,48h后荧光倒置显微镜下观察基因表达产物的分布,RT-PCR检测mRNA在体外水平的表达.利用睾丸注射法制备转基因小鼠,在F1代和F2代个体DNA水平和蛋白水平上检测目的基因的表达情况.[结果]成功克隆出徐淮山羊SCD1基因的全序列cDNA,大小为1 074 bp,编码357个氨基酸,GenBank 登录号为JX854036,徐淮山羊SCD1序列与人、褐家鼠、小家鼠、绵羊、牛和野猪相应编码区的同源性分别为86％、83％、82％、98％、95％、90％,氨基酸序列同源性分别为84％、79％、79％、96％、92％、95％;成功构建了融合表达载体pEGFP-C1-SCD1; RT-PCR检测mRNA表达明显;EGFP-SCD1融合蛋白定位在NIT-3T3细胞质中,与在线软件预测一致;通过尾静脉注射和睾丸注射,该基因可以在小鼠体内暂态表达和持续性表达,且可以稳定遗传.[结论]体外克隆的徐淮山羊SCD1基因cDNA在单细胞水平上表达于细胞质中,在小鼠体内也可以表达.

关键词：徐淮山羊、硬脂酰辅酶A脱氢酶、真核表达、NIH-3T3细胞、荧光蛋白、转基因鼠

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资助基金：国家转基因重大专项2011ZX08008-003,2009ZX08008-003B

在线出版日期：2013-12-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：3695-3703