莫氏巴贝斯虫滑动体组件蛋白基因gap45、gap50、myo A和m/c的克隆表达与多克隆抗体制备

摘要：

[目的]克隆和表达莫氏巴贝斯虫滑动体组件蛋白GAP45(gliding associated protein 45,GAP45)、GAP50(gliding associated protein 50,GAP50)、肌球蛋白A(Myosin A,Myo A)和肌球蛋白轻链(myosin light chain,MLC)基因及制备兔源性多克隆抗体.[方法]利用末端快速扩增(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)技术从莫氏巴贝斯虫裂殖子cDNA中扩增gap45、gap50、myoA及mlc基因,将获得的全长或基因的部分序列构建pGEX-4T-1原核表达载体,在大肠杆菌BL21 (DE3) pLys中用IPTG诱导表达；融合蛋白经纯化后免疫家兔,制备多克隆抗体,并用ELISA测定抗体的效价及反应性.[结果]获得了gap45、gap50、myoA和mlc基因的全长分别为664、1391、773和2538 bp,开放阅读框长度分别为567、1194、606和2514 bp,制备的多克隆抗体具有较好的特异性,效价高于1∶25600.[结论]克隆了滑动体组件蛋白gap45、gap50、myoA和mlc基因的全长,并制备了多克隆抗体,为筛选巴贝斯虫疫苗和诊断用抗原和药物靶位、研究其生物学入侵机制奠定了基础.

关键词：巴贝斯虫、RACE、滑动体、克隆、表达、多克隆抗体

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资助基金：国家自然科学基金项目31072130,30800820,30972182,31001061;甘肃省重点项目0801NKDA033,1002NKDA035;"973"项目2010CB530206;"948"项目2010-S04;国家肉牛牦牛产业体系项目CARS-38;科技部合作专项、欧盟EPIZONEFOOD-CT-2006-016236;ASFRISK№211691;ARBOZOONET№211757;PIROVACKBBE-3-245145

在线出版日期：2013-10-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：2175-2182