鸭维甲酸诱导基因Ⅰ克隆及其结构域功能分析

摘要：

[目的]克隆鸭维甲酸诱导基因Ⅰ (retinoic acid inducible gene Ⅰ,RIG-Ⅰ),分析其不同结构域的功能.[方法]根据GenBank上公布的鸭RIG-Ⅰ序列设计引物,利用RT-PCR克隆鸭RIG-Ⅰ基因CDS (coding sequence)区,根据保守结构域预测结果,构建携带6*his组氨酸标签的不同结构域缺失突变体的真核表载体(RIG-Ⅰ-Full、RIG-Ⅰ-N和RIG-Ⅰ-C),转染鸡胚成纤维细胞DF1,经RT-PCR、间接免疫荧光方法鉴定重组质粒在细胞中转录与表达;同时,利用RT-qPCR检测RLR抗病毒信号通路中的IFN-β、Mx1和PKR等下游基因的表达变化.[结果]鸭RIG-Ⅰ基因CDS区全长2802 bp,共编码933个氨基酸；不同结构域缺失突变体的真核表载体转染DF1细胞后,重组蛋白均在DF1细胞中表达；RT-qPCR结果显示,N端能显著激活RLR通路上IFN-β、Mx1及PKR基因的表达上调.[结论]duRIG-Ⅰ及不同区段均能在DF1细胞中表达,其中N端在调节RLR抗病毒信号通路下游基因的表达过程中发挥了重要作用.

关键词：鸭、RIG-Ⅰ基因、克隆、RLR通路

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资助基金：现代农业产业技术体系建设专项CARS-43-3;江苏高校优势学科建设工程资助项目苏政办发[2011]137号

在线出版日期：2013-10-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：2094-2102