Arkadia和UCH37表达载体的构建及其对TGF-β1/Smads信号通路的影响

摘要：

[目的]构建泛素启动酶Arkadia和泛素羧基末端水解酶-5(亦称UCH37)的表达载体,并探讨Smad7蛋白的泛素化修饰对马兜铃酸肾病中TGF-β1/Smads信号通路的影响.[方法]通过观察绿色荧光的表达量及real-time PCR反应优化转染条件,转染Arkadia和UCH37 siRNA,real-time PCR检测mRNA表达抑制率.分别构建Arkadia和UCH37的表达载体pGPU6/GFP/Neo,经鉴定后转染细胞,real-time PCR和Western blotting检测Arkadia、UCH37和Smad7的表达变化.[结果]①30 pmol siRNA和1.5μL LipofectamineTM 2000为最佳转染条件；②Arkadia-1490和UCH37-721的干扰效果最明显；③载体的插入序列完全正确,且pGPU6/GFP/Neo-Arkadia能上调马兜铃酸肾病模型中Smad7的表达,而pGPU6/GFP/Neo-UCH37使Smad7表达下降.[结论]成功构建了表达载体pGPU6/GFP/Neo-Arkadia和pGPU6/GFP/Neo-UCH37,且Arkadia和UCH37可分别放大、抑制TGF-β1/Smads信号通路.

关键词：Arkadia基因、UCH37基因、转染、表达载体、TGF-β1/Smads信号通路

所属期刊栏目：45

分类号：S814.4(普通畜牧学)

资助基金：国家自然科学基金;北京市自然科学基金;北京市属高校人才强教i计划项目

在线出版日期：2012-09-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1848-1856