抗庆大霉素单克隆抗体的制备及其初步应用

摘要：

”目的”制备抗庆大霉素(gentamicin,GM)的高亲和力特异性单克隆抗体,并鉴定其免疫学特性,为进一步研究GM快速检测试剂盒和试纸条打下基础.”方法”用EDC法将BSA和OVA分别和GM偶联作为免疫原或包被原,并经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定.用合成的BSA-GM免疫Balb/c小鼠,经过4次免疫后,用间接ELISA和阻断ELISA选择细胞融合备用鼠,选择高效价、敏感的小鼠进行抗原超强免疫;取其脾细胞应用杂交瘤技术与骨髓瘤细胞建立分泌GM 单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)的杂交瘤细胞株;用体内诱生腹水法制备GM mAb,对GM mAb的效价,敏感性和特异性等免疫学特性进行鉴定,;应用阻断ELISA试验原理组装GM-Kit,并对鲜奶中添加的GM标准样品进行测定.”结果”SDS-PAGE电泳鉴定表明BSA-GM人工抗原偶联成功;免疫的3只小鼠血清抗体效价均达到10-3;其中2号小鼠血清GM抑制效价较高且IC50最低,达17.28 ng·mL-1,融合后筛选出5E2-D7、1A3-A9、5E2-A12和2A6-B5共6株敏感特异的杂交瘤细胞,其细胞培养上清液效价分别为1:1600、1:800、1:800和1:800,腹水效价分别为1:2.05×107、1:5.12×106、1:2.56×106和1:2.56 x106,5E2-D7株对GM的IC50为0.30 ng·mL-1,与链霉素、卡那霉素等其他氨基糖苷类抗生素无交叉反应性;检测鲜牛奶样的平均添加回收率分别为96.0%,平均变异系数均低于15%.”结论”本试验获得了高效价、敏感、特异的抗GM mAb,为GM残留检测奠定了坚实的基础.

关键词：庆大霉素、单克隆抗体、杂交瘤、初步应用

所属期刊栏目：43

分类号：S8(畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂)

资助基金：”十一五”国家科技支撑计划2006BAK02A21

在线出版日期：2010-11-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：2584-2589