鹅源草酸青霉CBHⅠ基因克隆及真核表达载体构建

摘要：

[目的]鹅源草酸青霉F67(Penicillium oxalicum Currie & Thom)纤维素酶二糖水解酶(cellobiohydrolase,CBHⅠ)基因克隆并构建真核表达载体,为该菌株分子特性的进一步研究及构建高效纤维素分解菌奠定基础.[方法]首先通过兼并PCR法扩增CBH Ⅰ基因片段,然后利用改良热不对称交错PCR(TAIL-PCR)技术克隆CBHⅠ基因5'端和3'端侧翼序列,最后采用RT-PCR法扩增鹅源草酸青霉F67 CBH Ⅰ基因序列全长,并对该基因进行生物信息学分析,构建pPIC9K真核表达载体.[结果]分别扩增到鹅源草酸青霉F67纤维素酶CBHⅠ基因片段A(EU574736)、5'端序列B1(EU603295)、3'端序列B2(EU652768)及全长基因C(EU727171),并成功构建真核表达载体pPIC9K-CBHⅠ;生物信息学分析表明,该基因蛋白序列与微紫青霉氨基酸序列同源性最高,达76%,前26个氨基酸为信号肽序列,疏水性可达2.63,由催化功能域、衔接区和真菌性纤维素结合域构成,其三级结构主要为β-sheet.[结论]鹅源草酸青霉纤维素酶CBH Ⅰ基因全长序列的克隆进一步丰富了丝状真菌的生物信息学资源;其真核表达载体的构建为将该菌株进一步在真核宿主中表达,从而获得高效工程菌株奠定了怂基础.

关键词：鹅源草酸青霉、外切葡聚糖酶、TAIL-PCR

所属期刊栏目：43

分类号：S6(园艺)

资助基金：山东省农业良种产业化工程项目2008BADB2B08

在线出版日期：2010-05-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1464-1472