枣选择性扩增微卫星体系的建立及优化

摘要：

”目的”建立和优化枣的选择性扩增微卫星(SAM)技术体系,丰富枣群体遗传学研究的方法,同时为枣利用SAM法开发SSR引物提供技术参考和模板.”方法”以冬枣、大荔龙枣和金丝小枣为试材,采用CTAB法提取样品DNA,对SAM试验过程中的酶切-连接、抑制性扩增,预扩增,选择性扩增等关键因子进行研究.”结果”利用Pst Ⅰ和Mse Ⅰ双酶切系统,分步法进行酶切-连接是后续试验成功的关键,抑制性扩增(20.0 μL体系)模板取酶切连接液2.0μL,预扩增和选择性扩增(20.0μL体系)的模板分别取上步扩增的稀释产物各2.0μ L;抑制性扩增和预扩增反应中,ExTaq取0.5 U,反应25个循环,产物稀释20倍进行下一步扩增;选择性扩增采用前6个循环中退火温度梯度降低(每循环降低1℃)的反应程序,体系中可将ExTaq用量增加到1.0 U以保证酶的保真效果.”结论”试验利用优化后的反应体系,选用16个Mse Ⅰ adapter+NN primer和SSR primer(PCT_6)组成引物对进行筛选,获得了谱带清晰、分辨率高、多态性丰富的电泳图谱.该研究结果为利用SAM技术开展枣的亲缘演化、遗传多样性分析及SSR引物开发等方面的研究打下了基础.

关键词：枣、选择性扩增微卫星(SAM)、体系建立、优化

所属期刊栏目：43

分类号：S6(园艺)

资助基金：国家科技支撑计划2006BAD01A1701;科技部农业科技成果转化资金项目2008GB24320424;中国林业科学研究院林业研究所重点项目ZD200913

在线出版日期：2010-03-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：371-379