新型高产β-胡萝卜素巴斯德毕赤酵母表达宿主菌的构建

摘要：

分泌型巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)作为高效表达宿主菌已被广泛应用,通过高密度培养工艺用于多种酶制剂(如植酸酶、甘露聚糖酶等)的规模生产.然而,在生产过程中产生的大量菌体利用率低,多数被废弃掩埋,或只能作为廉价的菌体蛋白,造成大量的资源浪费.为提高酵母发酵副产物的利用率,向毕赤酵母宿主菌GS115中导入来源于红发夫酵母(Xanthophyllomyces dendrorhous)β-胡萝卜素合成途径中的关键基因(idi、crtE、crtYB和crtI),获得了胞内高产β-胡萝卜素的工程菌株P.pastoris GS115-CARO,实现工业生产中的菌体蛋白的高附加值利用.同时以来源于嗜热篮状菌(Talaromyces leycettanus JCM12802)的甘露聚糖酶基因Man5T作为参照,验证了宿主菌P.pastoris GS115和P.pastoris GS115-CARO在表达外源蛋白的差异.结果表明:Man5T基因的导入并没有影响,两株宿主菌的甘露聚糖酶表达量(分别为280 U/mL和286 U/mL,P＞0.05),但宿主菌P.pastoris GS115-CARO胞内β-胡萝卜素产量高达到31.27 mg/g(菌体干重dry cell weight,d.w).构建的工程菌株不仅可以实现外源酶制剂的高效表达,有效地提升酵母菌体资源的利用价值,同时也在一定程度上了解决了发酵菌体对环境的污染问题.

关键词：毕赤酵母、红发夫酵母、β-胡萝卜素、甘露聚糖酶

所属期刊栏目：20

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家高技术研究发展计划（863计划）2014AA021301

在线出版日期：2018-03-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：48-55