利用单因子和正交设计双重实验法优化鹧鸪茶RAPD-PCR反应体系

摘要：

为了建立鹧鸪茶RAPD-PCR的优化反应体系,首先通过单因素试验选定其各影响因子比较适宜的浓度范围,再利用正交试验设计方法,对影响鹧鸪茶RAPD-PCR反应的5种因素进行4水平优化试验.并运用SAS软件对试验结果进行了分析,最后确定优化的RAPD-PCR反应体系为:10×Buffer缓冲液2.5μL+Mg2+2.5 mmol/L+dNTPs 0.2 mmol/L+Taq DNA聚合酶1.5 U+S28引物0.48 mm01/L+ 80 ng模板,定容至25μL.PCR扩增程序为:94℃预变性4 min,然后按94℃变性30 s,38℃退火45 s,72℃延伸120 s,进行45个循环,最后72℃延伸10 min;16℃保存.该优化的RAPD-PCR反应体系具有良好的稳定性和重现性,可应用于鹧鸪茶不同居群间亲缘关系和遗传多样性分析.

关键词：鹧鸪茶、RAPD、影响因子、体系优化

所属期刊栏目：1

分类号：Q785(基因工程（遗传工程）)

资助基金：海南大学校级重点学科专项资金研究课题"海南野生鹧鸪茶资源的种质收集与遗传多样性的RAPD分子标记"

在线出版日期：2011-12-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：14-21