寿胎丸抑制滋养细胞miR-29c-3p/Caspase-8/GSDME焦亡信号轴治疗URSA的作用与机制研究

摘要：

目的:探讨寿胎丸通过靶向miR-29c-3p/Caspase-8/GSDME信号通路减轻滋养细胞焦亡治疗不明原因复发性自然流产(URSA)的作用与关键机制.方法:全转录组高通量测序分析正常早孕妇女(NP组)和URSA患者绒毛组织中的差异mRNAs;Western blot检测Caspase-8、Caspase-3和GSDME表达及活化水平;qRT-PCR检测miR-29c-3p和CASP8 mRNA表达.体外调控HTR-8/SVneo细胞miR-29c-3p表达,分析其对Caspase-8和细胞焦亡相关分子表达及细胞培养上清中IL-1β、IL-18蛋白水平的影响.补肾固冲经典方剂寿胎丸含药血清作用于HTR-8/SVneo细胞后,观察miR-29c-3p、CASP8 mRNA表达和Cas?pase-8、Caspase-3及GSDME蛋白表达及活性,并检测培养上清中IL-1β与IL-18蛋白水平.CBA/J雌鼠和DBA/2雄鼠交配构建URSA小鼠模型,随机分为溶剂对照组、寿胎丸组、寿胎丸+INC组及寿胎丸+miR-29c-3p inhibitor组,观察各组胚胎吸收情况;检测各组胎盘组织中miR-29c-3p、Caspase-8、Caspase-3和GSDME表达及血清中IL-1β、IL-18蛋白水平.结果:与NP组比较,URSA患者绒毛组织Caspase-8、Caspase-3及GSDME表达及活化水平显著升高,而miR-29c-3p表达显著降低,且与CASP8 mRNA表达呈显著负相关.上调HTR-8/SVneo细胞miR-29c-3p表达后,CASP8 mRNA表达显著降低,Caspase-8、Cleaved Caspase-8、Cleaved Caspase-3、GSDME-N及细胞培养上清中IL-1β、IL-18蛋白水平明显下降,而抑制miR-29c-3p表达作用相反.双荧光素酶报告基因系统显示,miR-29c-3p能够与CASP8 mRNA 3'UTR直接结合.与对照组血清相比,寿胎丸含药血清能够上调HTR-8/SVneo细胞miR-29c-3p表达,而Caspase-8、Caspase-3、GSDME活性及IL-1β、IL-18表达均显著下调.与溶剂对照组相比,寿胎丸治疗组小鼠胚胎吸收减少,胚胎吸收率显著降低,小鼠胎盘组织中miR-29c-3p显著升高,Caspase-8、Caspase-3、GSDME活性及血清中IL-1β、IL-18表达显著下降;而miR-29c-3p inhibitor能够抑制寿胎丸的妊娠保护作用.结论:miR-29c-3p低表达促进Cas?pase-8/GSDME介导的滋养细胞焦亡,参与URSA发生;寿胎丸靶向miR-29c-3p/Caspase-8/GSDME信号通路,减轻滋养细胞焦亡,进而保护妊娠,治疗URSA.

关键词：原因不明复发性自然流产、miR-29c-3p、寿胎丸、滋养细胞、细胞焦亡

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分类号：R285.5(中药学)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;山东省自然科学基金面上项目;山东省中央引导地方科技发展资金项目;泰山学者青年专家项目;济南市科技局科研带头人工作室项目

在线出版日期：2023-05-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：750-758