小鼠抗KLH多克隆抗体的制备及TDAR实验间接ELISA定量检测方法的建立

摘要：

目的:通过制备小鼠抗KLH多克隆抗体,优化反应条件建立KLH特异性抗体ELISA定量分析方法,以期提供一种特异性好、灵敏度高及误差低的TDAR实验检测方法.方法:利用盐析沉淀和亲和层析纯化技术分离和纯化小鼠抗KLH特异性多克隆IgG抗体;以纯化后的抗体作为标准品,建立TDAR实验间接ELISA定量检测方法,并对该方法进行线性范围、特异性、变异系数(CV)及检测限验证.结果:以KLH包被浓度为80μg/ml,山羊抗小鼠IgG/HRP酶标二抗的稀释倍率为1:20000条件进行间接ELISA定量分析的方法学验证,检测线性范围为390.63～25000 ng/ml,R2=0.9848,线性良好;批内和批间CV均<10％;检测限为194.83 ng/ml.结论:通过制备抗KLH多克隆抗体,并优化实验反应条件来建立间接ELISA定量分析方法,其线性范围、特异性及批内、批间CV均满足实验要求,是一种高灵敏度的TDAR实验检测方法.

关键词：钥孔血蓝蛋白、T细胞依赖性抗体反应(TDAR)、酶联免疫吸附法、定量分析、抗体

所属期刊栏目：39

分类号：R392.33

资助基金：海南省重点研发项目;海南省研究生创新科研课题

在线出版日期：2023-04-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：586-589,594