miR-449a靶向调控外周血Toll样受体5影响风湿性心脏病发生发展的分子机制研究

摘要：

目的:研究微小RNA-449a(miR-449a)是否通过靶向外周血中的Toll样受体5(TLR5)影响风湿性心脏病的发生发展.方法:实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测风湿性心脏病患者外周血中TLR5和miR-449a的表达水平.在风湿性心脏病心肌细胞中转染miR-449a模拟物或TLR5小干扰RNA si-TLR5.采用qRT-PCR检测miR-449a表达,Western blot分析细胞核相关抗原Ki67(Ki67)、活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved-caspase-3)、TLR5、磷酸化p65(p-p65)和磷酸化IκBα(p-IκBα)蛋白表达,MTT测定细胞增殖,流式细胞仪评估细胞凋亡,ELISA测定炎症因子IL-1β、TNF-α水平.Star?base靶位点预测软件与双荧光素酶报告基因分析miR-449a与TLR5之间的靶向关系.在风湿性心脏病心肌细胞中共转染miR-449a模拟物和TLR5过表达质粒pcDNA-TLR5,观察细胞增殖、凋亡和NF-κB信号通路活性变化.结果:风湿性心脏病患者外周血中miR-449a的表达水平明显降低,TLR5 mRNA和TLR5蛋白表达水平显著升高(P<0.05).过表达miR-449a明显提高风湿性心脏病心肌细胞的Ki67蛋白表达水平、细胞存活率,显著降低Cleaved-caspase-3、p-p65、p-IκBα蛋白表达水平、细胞凋亡率和IL-1β、TNF-α水平(P<0.05).低表达TLR5明显提高风湿性心脏病心肌细胞的Ki67蛋白表达水平、细胞存活率,显著降低Cleaved-caspase-3蛋白表达水平、凋亡率(P<0.05).miR-449a通过靶向TLR5调控TLR5蛋白的表达.高表达TLR5后,miR-449a对风湿性心脏病心肌细胞增殖、Ki67蛋白表达的促进作用,以及miR-449a对细胞凋亡、Cleaved-caspase-3、p-p65、p-IκBα蛋白表达和IL-1β、TNF-α水平的抑制作用被逆转.结论:miR-449a通过靶向TLR5抑制NF-κB信号通路活性,促进风湿性心脏病心肌细胞的增殖与抑制其凋亡.

关键词：风湿性心脏病、miR-449a、TLR5、增殖、凋亡、NF-κB信号通路

所属期刊栏目：38

分类号：R541.2(心脏、血管（循环系）疾病)

资助基金：河北省医学科学研究课题计划项目20190866

在线出版日期：2022-11-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：2057-2063