改良SELEX技术筛选福氏志贺菌2a特异性适配体

摘要：

目的:构建与福氏志贺菌2a高亲和性、特异性结合的DNA寡核苷酸适配体库.方法:体外合成76 nt高通量随机序列的单链DNA寡核苷酸文库(ssDNA),运用全细菌指数富集的配体系统进化技术(whole-bacteria SELEX),福氏志贺菌2a作为靶标与文库ssDNA反应;通过优化PCR反应,将Lambda酶外切及葡聚糖凝胶层析纯化技术用于次轮反应文库的制备,荧光分光光度计跟踪筛选过程,流式细胞仪克隆测序特异性单链核酸适配体,生物信息学技术分析其一、二级结构.结果:经过PCR技术10轮正向筛选和6轮消减菌筛选,通过Lambda酶外切及葡聚糖凝胶层析纯化,ssDNA平均回收率高达72.33％.依据一级结构的同源序列建立了36个寡核苷酸探针组群.流式细胞仪分析获得1条与福氏志贺菌2a特异性结合的适配体(命名ZH-21).结论:基于全菌消减SELEX技术,结合Lambda酶外切及凝胶层析纯化技术,建立一种快速、稳定、高效、特异性高和成本低的筛选福氏志贺菌2a特异性单链核酸适配体的方法.

关键词：全菌消减SELEX技术、福氏志贺菌2a、凝胶层析纯化技术、适配体

所属期刊栏目：37

分类号：R378(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金;北华大学研究生创新计划项目

在线出版日期：2021-07-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1226-1230