单个B细胞制备CRP单克隆抗体及其ELISA检测体系的初步建立

摘要：

目的:用单个B细胞抗体制备技术结合Exip293真核表达系统制备hs-CRP单克隆抗体.方法:用重组CRP蛋白免疫小鼠,荧光标记探针和流式分选技术分离出表达CRP单克隆抗体的单个B细胞,通过PCR方法扩增出编码CRP单克隆抗体蛋白的轻重链核酸序列并构建重组质粒,质粒转染到Expi 293细胞中制备出单克隆抗体蛋白.结果:用间接ELISA法筛选出两个具有良好特异性的单克隆抗体20#,22#,将这两个抗体配对并建立ELISA双抗体夹心检测方法,CRP浓度在15～250 ng/ml范围内有较好的检测线性(y=0.003x-0.0358,R2=0.9974),精密度分析的批内变异系数CV为6.7％ ～9.37％,批间变异系数为8.52％ ～9.10％,平均回收率为98％,与临床血清检测值具有良好的相关性,达到CRP检测要求.结论:本研究所用的单个B细胞分离分选方法结合Expi 293真核表达系统在制备单克隆抗体方面具有省时、高效、特异性好、灵敏度高的特点,具有很好的应用价值.

关键词：单个B细胞、CRP、单克隆抗体、真核表达系统、ELISA

所属期刊栏目：35

分类号：R446.6(诊断学)

资助基金：广东省食品药品监督管理局2018年科技创新立项项目2018ZDB14

在线出版日期：2019-01-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：69-73