人源化抗Siglec-9抗体Fab片段的制备及鉴定

摘要：

目的:构建人源化抗Siglec-9抗体Fab段原核表达质粒,表达、纯化此抗体以及特性分析,并初步探讨此抗体的生物学功能.方法:利用聚合酶链式反应(PCR)分别获得抗体轻链和重链的可变区及恒定区,经重叠延伸PCR连接,酶切后与原核表达载体pETDUET-1重组,转入表达感受态Escherichia coli BL21 中,通过蛋白纯化系统AKTA和His-trap Lambda Fab纯化.使用SDS-PAGE、ELISA以及Western blot鉴定和分析.采用实时荧光定量PCR初步检测抗Siglec-9抗体Fab段对炎性细胞因子TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8的mRNA表达量的影响.结果:成功获得抗体轻链和重链,构建人源化抗Siglec-9抗体Fab段原核表达系统,经 SDS-PAGE、Western blot、ELISA 检测证实抗 Siglec-9 抗体 Fab 段与 Siglec-9 抗原特异性结合.抗Siglec-9抗体Fab段可抑制炎性细胞因子TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8的mRNA表达量.结论:人源化抗Siglec-9抗体Fab段进行了原核系统表达、纯化和鉴定,并初步验证可抑制炎性细胞因子的mRNA表达量,为进一步研究该抗体的生物学特性及应用奠定基础.

关键词：Siglec-9、Fab片段、抗Siglec-9抗体、THP-1细胞、炎性细胞因子

所属期刊栏目：34

分类号：R318(医用一般科学)

资助基金：军队特需药品保密专项"十二五"计划2013ZX09J13110-05B

在线出版日期：2018-08-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：877-881