梅毒螺旋体膜蛋白Tp0971经TLR2/NF-κB诱导巨噬细胞分泌细胞因子

摘要：

目的:探讨梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)膜蛋白Tp0971诱导巨噬细胞分泌细胞因子的分子机制.方法:以Tp Nichols株基因组为模板,PCR扩增Tp0971基因并构建重组质粒pET28a(+)/Tp0971,随后将其转化至表达宿主菌E.coli Rosseta中,IPTG诱导表达,Ni-NTA亲和层析柱纯化重组蛋白.经去除Tp0971重组蛋白中的内毒素后,将其刺激巨噬细胞,ELISA检测细胞因子IL-8、IL-1β和IL-6的分泌水平.并采用Toll样受体2(TLR2)中和抗体或TLR2 siRNA,以及核转录因子κB(NF-κB)抑制剂PDTC处理细胞,观察TLR2和NF-κB在介导细胞因子分泌中的作用.结果:成功构建pET28a(+)/Tp0791原核表达载体,并表达出一相对分子量为29 kD的重组蛋白.ELISA结果显示,0.5~10 μg/ml Tp0791能以剂量依赖性方式诱导巨噬细胞分泌IL-8、IL-1β和IL-6.采用siRNA沉默TLR2表达,或用TLR2中和抗体封闭后,IL-8、IL-1β和IL-6分泌明显减少.此外,Tp0791也能增加细胞核中NF-κB p65的表达水平,采用NF-κB抑制剂PDTC处理后,细胞因子分泌水平也显著降低.结论:Tp0971经TLR2/NF-κB可诱导巨噬细胞分泌细胞因子.

关键词：梅毒螺旋体、膜蛋白、细胞因子、Toll样受体2

所属期刊栏目：33

分类号：R377(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：湖南省医药卫生科研计划B2013-134

在线出版日期：2017-06-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：668-672