凡纳滨对虾过敏原蛋白Lit v 1.2的原核表达与纯化

摘要：

目的:诱导表达凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)过敏原蛋白Lit v 1.2,并利用6-His标签获得纯化蛋白.方法:用NdeⅠ和PstⅠ双酶切实验室前期构建保存的pGEM-T-Lit v 1.2质粒,将目的基因与表达载体pET44a连接,转入表达菌株Rosetta,通过氨苄青霉素( Amp)抗性基因筛选,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷( IPTG)诱导表达,获得Lit v 1.2蛋白. 通过亲和层析纯化蛋白,SDS-PAGE凝胶电泳检测纯化效果. 结果:成功构建了重组质粒pET44a-Lit v 1.2,SDS-PAGE结果显示Lit v 1.2基因在大肠杆菌Rosetta中获得高效的可溶性表达,蛋白质分子量与理论值相符,且获得的目标蛋白纯度高. 结论:本研究通过原核表达及亲和层析获得高产量、高纯度的凡纳滨对虾过敏原蛋白Lit v 1.2 ,为进一步研究Lit v 1.2的免疫学特性奠定基础.

关键词：凡纳滨对虾、过敏原、原肌球蛋白、重组表达、蛋白纯化

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分类号：R392.11

资助基金：国家重大科技专项2014ZX08011-005B;广东高校科技创新项目2013KJCX148;广州市科技攻关201300000159项目的资助

在线出版日期：2016-01-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1659-1662