结核分枝杆菌ClpC2蛋白的纯化、抗血清的制备及抗原性分析

摘要：

目的：分别探索结核分枝杆菌（ Mycobacterium tuberculosis ，MTB） ClpC2蛋白和兔抗ClpC2多克隆抗体作为肺结核检测抗原或抗体的可行性。方法：诱导表达重组蛋白ClpC2（rClpC2）；SDS-PAGE与Western blot 鉴定rClpC2后利用亲和层析法进行纯化；纯化后的重组蛋白免疫新西兰大白兔，Western blot检测兔抗血清的特异性；双向免疫扩散法与酶联免疫吸附法（ ELISA）测定兔抗血清效价；rClpC2通过间接ELISA进行抗原性的初步检测，兔抗ClpC2多克隆抗体通过间接ELISA检测肺结核病人血清中ClpC2抗原。结果：rClpC2经SDS-PAGE分析，在相对分子质量46 kD处可见特异性条带；Western blot分析rClpC2可与MTB H37 Rv株感染的小鼠血清发生抗原抗体反应；经Bandscan分析rClpC2约占菌体总蛋白的58.7％，纯化后rClpC2的纯度为88.5％；Western blot验证兔抗血清可与卡介苗（Bacillus calmette-guerin，BCG）的ClpC2蛋白发生抗原抗体反应；双向免疫扩散法测定兔抗血清效价为1∶32，ELISA法测定兔抗血清效价为1∶320000；rClpC2在检测肺结核病人中的检出率为46％，检测敏感性为46％，特异性为90％；兔抗ClpC2多克隆抗体在检测肺结核病人中的检出率为40％，检测的敏感性为40％，特异性为90％。结论：成功纯化结核分枝杆菌ClpC2蛋白，制备特异性兔抗ClpC2多克隆抗体，为进一步研究ClpC2蛋白的生物功能、ClpC2作为诊断靶标、药靶候选蛋白的可行性及兔抗ClpC2多克隆抗体生物学功能提供实验基础。

关键词：结核分枝杆菌、rClpC2、兔抗血清

分类号：R378.91(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家青年科学基金资助项目 No.81101216。

在线出版日期：2014-07-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：784-788,796