抗人软骨寡聚基质蛋白单克隆抗体的研制及表位鉴定

摘要：

目的:为了揭示循环血液中存在的软骨寡聚基质蛋白(Cartilage Oligomeric Matrix Protein,COMP)片段,探索COMP逃避自身免疫耐受的途径及机制,需制备高效、专一的识别COMP不同结构域的单克隆抗体.方法:利用真核表达系统对人COMP进行了一系列的表达、并用亲和层析法结合离子交换层析法进行纯化.纯化的COMP为抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术结合有限稀释传代法筛选得到稳定分泌抗人COMP单克隆抗体的杂交瘤细胞株,用COMP单结构域片段结合生物信息学方法分析鉴定单克隆抗体结合表位.用不同种属来源的COMP分析单克隆抗体结合表位的保守性.结果:COMP及单结构域片段为分泌到细胞外的可溶性分子利于蛋白的纯化,筛选获得4株稳定分泌抗人COMP单克隆抗体细胞株,4株单克隆抗体的亚型为IgG1,经COMP单结构域片段检测证明4株单克隆抗体识别不同的表位,表位预测软件初步确定4株单克隆抗体识别表位所在区域,间接ELISA及免疫组化证实其中3株单克隆抗体与不同种属来源的COMP有较好的结合特性.结论:成功制备了4株识别不同表位的抗COMP单克隆抗体,为揭示血液中存在的COMP片段和进一步研究COMP逃避自身免疫耐受机理提供了研究工具.

关键词：软骨寡聚基质蛋白、单克隆抗体、表位、类风湿性关节炎

所属期刊栏目：29

分类号：R392.11

资助基金：国家自然科学基金30972693;38批留学回国人员启动基金、中央高校基本科研业务费专项资金CCNU11A02011等基金

在线出版日期：2013-06-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：370-376