新肠道病毒71型病毒样颗粒的制备

摘要：

目的:研究新肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)的制备方法.方法:依据昆虫细胞偏爱密码子优化EV71 P1和EV71 3CD基因,将二者分别克隆至供体质粒pFastBac Dual多角体蛋白启动子pPh和pP10上;构建重组pFastBac Dual EV71 P1-3CD质粒,并与Bacmid质粒转座后,获得重组杆状病毒表达质粒转染至Sf9细胞,应用PCR、免疫荧光、SDS-Page和Western blot方法鉴定EV71 VLPs表达情况,最后利用蔗糖密度梯度离心的方法纯化EV71 VLPs.结果:经昆虫密码子优化的EV71 P1和EV71 3CD基因,利用Bac-to-Bac系统成功组装了EV71 VLPs,纯化EV71 VLPs的浓度为0.817 mg/ml,纯度>90%.结论:成功地构建了重组杆状病毒EV71 P1-3CD Bacmid表达质粒,并表达和纯化了 EV71 VLPs,这为今后EV71 VLPs疫苗的研究奠定了基础.

关键词：EV71、Bac-to-Bac表达系统、病毒样颗粒

所属期刊栏目：28

分类号：R378.5(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2013-02-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1014-1018,1031