幽门螺杆菌cag4蛋白的原核表达、纯化及鉴定

摘要：

目的:构建幽门螺杆菌cag4蛋白的原核重组体系,表达、纯化融合蛋白.方法:利用PCR技术从幽门螺杆菌NCTC11637中克隆了cag4基因;经T-A克隆,酶切鉴定,构建了原核表达载体pET-28a-cag4;经测序鉴定正确后,转化进入大肠埃希菌 BL21(DE3)进行异源表达.利用IPTG体外诱导后,经SDS-PAGE和Western bolt鉴定目的蛋白表达后,采用Ni2+-NTA柱在变性条件下纯化目的蛋白,并对重组蛋白进行透析复性处理.将SDS煮沸法获得的溶壁微球菌肽聚糖掺入SDS-PAGE作为底物,进行酶谱分析.结果:成功扩增了cag4基因基因;重组质粒在大肠埃希菌 BL21(DE3)中诱导表达出pET-28a-cag4融合蛋白;优化了pET-28a-cag4原核表达体系的最适条件;Western bolt分析结果显示表达的基因重组蛋白与目的蛋白相符;酶谱分析显示其具有明显的肽聚糖水解活性.结论:幽门螺杆菌cag4蛋白具有溶菌糖基转移酶活性.

关键词：幽门螺杆菌cag4蛋白、原核表达、纯化、融合蛋白

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分类号：R739.4(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金项目30870096;江苏省高校自然科学基金项目08KJB310001;江苏大学临床医学科技发展基金项目JLY20080051

在线出版日期：2011-05-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：347-351