Rig-I蛋白C端Helicase结构域的原核表达、纯化及其多克隆抗体制备

摘要：

目的:为Rig-I蛋白结构与模式识别功能的深入研究提供灵敏、高效的免疫学检测试剂.方法:PCR法克隆小鼠Rig-I基因Helicase区编码序列(726～2 240 bp,编码241～746位氨基酸),构建带组氨酸标签的原核表达载体pET15b-mRig-I-H,阳性克隆经酶切、测序鉴定后转化E.coli BL21进行诱导表达.目的蛋白电泳分离并割胶纯化后免疫家兔制备抗血清.抗血清用ELISA、Western blot、细胞免疫荧光方法进行鉴定.结果:目的蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达,制备的抗Rig-I抗体效价达到1∶100 000,Western blot、细胞免疫荧光结果显示该抗体能够有效地对细胞内Rig-I蛋白的表达水平进行检测.结论:成功地对mRig-I-H进行了原核表达、纯化,抗mRig-I-H的多克隆抗体具有较高的特异性,为进一步研究Rig-I尤其是Helicase区的结构与功能奠定了坚实的基础.

关键词：Rig-I、Helicase、原核表达、多克隆抗体

所属期刊栏目：26

分类号：R392.33

资助基金：上海市科委生物医药领域重点科技攻关专项074319104、09JC1405200;中央高校基本科研业务费专项资金资助

在线出版日期：2010-11-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：774-777,782