人白细胞介素29在cos-7细胞中表达及其体外抗乙型肝炎病毒作用

摘要：

目的:克隆人细胞因子IL-29全长cDNA及其在cos-7细胞中表达,并初步探讨表达产物体外抗乙肝病毒(HBV)作用.方法:分离外周血单个核细胞;VSV感染后,提取总RNA,通过一步法RT-PCR获得IL-29全长cDNA.DNA测序正确后,将IL-29 cDNA的编码框序列构建到真核表达载体psectagB/His-myc中.氨苄青霉素板筛选及PCR鉴定,挑出阳性克隆进行扩增、转染cos-7细胞并经潮霉素及有限稀释法筛选稳定表达克隆.SDS-PAGE、Western blot鉴定,Ni2+亲和层析分离纯化得到主带分子量为33 000组氨酸标签重组人IL-29融合蛋白.体外以HepG2.2.2.15为靶细胞观察rhIL-29对HepG2.2.2.15培养上清液中HBV表面抗原(HBsAg)及e抗原(HBeAg)影响.结果:成功获得人IL-29全长cDNA并在cos-7细胞中稳定表达.SDS-PAGE、Western blot分析显示表达的rhIL-29融合蛋白为几个蛋白质区带,分子量在20 000～33 000之间纯化的rhIL-29融合蛋白,主带在33 000附近.rhIL-29融合蛋白具有抑制HBsAg及HBeAg分泌作用并且具有剂量效应,抑制率分别达85%.结论:获得具有生物活性的rhIL-29融合蛋白.rhIL-29融合蛋白在体外具有抑制HepG2.2.2.15细胞分泌HBsAg及HBeAg作用.

关键词：白细胞介素29(IL-29)、克隆、表达、抗乙肝病毒活性

所属期刊栏目：23

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：安徽省自然科学基金050430604

在线出版日期：2007-06-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：411-414