人TNF-αmRNA实时荧光定量PCR检测标准的构建

摘要：

目的:克隆人TNF-α cDNA,作为人TNF-αmRNA定量检测的标准品.方法:用RT-PCR法从人外周血单个核细胞的总mRNA中逆转录扩增TNF-α的cDNA,将纯化的TNF-α cDNA与pUCm-T载体进行连接,转化宿主菌DH-5α,然后提取重组质粒DNA,用限制性核酸内切酶HindⅢ、EcoRI进行双酶切鉴定并测序分析,最后对质粒标准进行实时荧光定量PCR检测.用聚乙二醇沉淀法纯化质粒并检测λ260 nm吸光度,确定原液的重组质粒拷贝浓度并以此制备荧光定量PCR梯度浓度标准品.结果:酶切鉴定、PCR扩增及测序分析均证实TNF-α cDNA重组到pUCm-T载体上.结论:成功克隆了TNF-α实时荧光PCR定量标准.

关键词：肿瘤坏死因子-α、核糖核酸、信使、逆转录-聚合酶链反应、T-A克隆

所属期刊栏目：20

分类号：R392.11

资助基金：浙江省医药卫生科研项目2003B119

在线出版日期：2004-12-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：783-785