颗粒酶B直接裂解部分断裂的基因组DNA--颗粒酶B诱导细胞凋亡新途径

摘要：

目的:颗粒酶B(Granzyme B,GraB)对核内物质具亲和力,体外除去核膜的细胞核中可观察到大量GraB聚积,观察GraB是否直接作用于基因组DNA.方法:通过抽提人外周血淋巴细胞总RNA,进行RT-PCR克隆GraB cDNA,构建GraB原核表达载体,用限制性酶切和DNA测序进行鉴定;异丙基-1-硫代-β-呋喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达产物.表达产物经亲和层析纯化后,观察其对基因组DNA的功能.结果:表达产物以可溶性分子形式存在于菌体中,具有良好的抗原性和特异性,特异性底物检测有活性,且具有直接作用于部分断裂的基因组DNA,使其发生进一步裂解的活性.结论:GraB直接作用于部分断裂的基因组DNA,这可能是GraB诱导细胞凋亡新的作用途径.

关键词：颗粒酶B、基因克隆、原核表达、凋亡

所属期刊栏目：19

分类号：R392.11

资助基金：国家自然科学基金39870723;广东省自然科学基金团队项目

在线出版日期：2004-01-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：818-820,824