FAA基因治疗及其基因表达调控序列新型重组载体的构建、鉴定
目的:为探索新型逆转录病毒载体L-entivector及其基因表达调控序列在造血细胞中的有效表达和基因治疗中的应用,用分子克隆的方法构建Fanconis Anemis(FA)患者A组基因(FANCA基因)基因治疗新型重组载体(Lentivector)和基因表达调控序列(启动子/增强子),进一步通过内切酶酶切位点鉴定插入的基因表达调控序列方向和目的基因的片段大小、目的基因特异引物PCR扩增特异片段鉴定目的基因。方法:首先将质粒Friend基因表达调控序列(Fr-MuLV F/P)强启动子/增强子插入载体Lentivector pRRLsin-18中相应克隆位点,成为pRRL sin-18 FrMuLV(test 1);用NotI、NcoI双酶切载体FochA-FANCA,低溶
点胶回收FANCA目的基因片段;应用polylinker、adapter方法多步克隆插入新型载体Lentivector pRRlsin-18(testl)中相应特异克隆位点,获得重组载体sin-18 FrMuLV E/P-FA(test 2),通过酶切鉴定重组载体插入的基因表达调控序列方向和目的基因的片段大小和方向,筛选正向阳性重组质粒,用PCR法进一步证实插入的FANCA基因片段。结果:挑取的阳性克隆经多个酶酶切鉴定,有Friend质粒390 bp基因表达调控序列(Fr-MuLV E/P)和4.5 kb FANCA目的基因片段酶切位点,用PCR引物扩增出目的基因相应片段,证明为正向重组体。结论:已成功构建表达FANCA基因的重组逆转录病毒载体及其基因表达调控序列,为进一步应用FANCA基因的新型重组载体Lentivector经包装后转染造血干细胞及其表达情况和相应的FAA基因治疗奠定了良好的工作基础。
FA贫血LentivectorFANCA基因DNA重组
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R392.2
教育部留学回国人员科研启动基金;美国中华医学会资助项目CMB
2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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191-194
