网素蛋白1和增强绿色荧光蛋白基因共表达慢病毒载体构建和鉴定及在结直肠癌细胞SW480中表达

摘要：

目的 构建和鉴定网素蛋白基因(PLS)1和增强绿色荧光蛋白(EGFP)共表达慢病毒载体,并检测其在人结直肠癌细胞株SW480中的表达水平.方法 采用聚合酶链反应(PCR)方法克隆PLS1基因;将PLS1基因连接到带有EGFP的慢病毒表达载体pEZ-Lv201中构建慢病毒载体;将构建的慢病毒载体质粒pEZ-PLS1-SV40-eGFP-IRES-Puro(pEZ-PLS1)与慢病毒包装质粒混合物Lenti-Pac HIV mix共转染293T细胞,收集慢病毒悬液;重组病毒转染H1299细胞,定量PCR法检测重组病毒滴度;将构建的pEZ-PLS1感染SW480细胞,荧光显微镜观察和Western印迹检测感染后SW480细胞中EGFP和目的基因PLS1表达.结果 基因测序分析证实克隆的PLS1基因与GenBank提供的序列完全一致;构建的重组慢病毒载体经双酶切、琼脂糖凝胶电泳鉴定证实PLS1正确插入pEZ-Lv201;定量PCR测定慢病毒滴度为0.1×109～1.0×109 TU/ml.在SW480细胞中重组病毒感染96 h后在荧光显微镜下可检测到较强的绿色荧光蛋白表达,Western印迹检测到在SW480细胞中PLS1蛋白过表达.结论 成功构建携带PLS1基因的重组慢病毒载体,在SW480细胞中有效表达.

关键词：网素蛋白1、增强绿色荧光蛋白、慢病毒载体、SW480细胞

所属期刊栏目：38

分类号：R34(人体生物化学、分子生物学)

在线出版日期：2018-03-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：302-305