人PETA-3／CD151基因RNAi慢病毒载体的构建及沉默效应鉴定

摘要：

目的：构建 PETA-3／CD151shRNA慢病毒表达载体，并在人乳腺癌细胞株 MCF-7细胞鉴定其转染及基因沉默效果。方法应用基因工程技术，构建4条针对PETA-3基因的RNAi靶序列，分别与慢病毒载体PgLV3连接，构建重组慢病毒表达载体PETA-3-shRNA-1～4；将连接产物转化到Top10感受态细胞，经筛选阳性克隆、测序鉴定。应用脂质体法转染293 FT细胞，进行病毒包装及滴度测定。将包装产生的4种重组慢病毒分别感染MCF-7细胞，实时定量PCR和Western印迹检测MCF-7细胞PETA-3 mRNA和蛋白的表达。根据筛选的结果，选取最有效的载体进行病毒的大量包装。结果4个慢病毒载体PCR和测序结果与预期结果一致，感染MCF-7细胞96 h后，PETA-3-shRNA-2 mRNA和蛋白的表达量与未感染慢病毒的细胞组及空载体感染组相比均明显下降，其中mRNA表达下降85％，蛋白表达下降84％（均P＜0.05）。 shRNA-2病毒载体大量包装后其滴度为1×109 TU／ml。结论成功构建针对PETA-3基因的慢病毒载体PETA-3-RNAi-LV3，体外感染MCF-7细胞后可有效抑制PETA-3基因和蛋白的表达。

关键词：PETA-3/CD151、RNA干扰、慢病毒、乳腺癌

所属期刊栏目：37

分类号：R73(肿瘤学)

资助基金：黑龙江省教育厅基金资助11511453；1252162612531782

在线出版日期：2017-03-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：271-273