稳定表达水通道蛋白-4细胞株的建立及应用价值

摘要：

目的 构建水通道蛋白-4 (AQP4)真核表达载体,转染HEK293细胞建立稳定表达AQP4的HEK293细胞株,并将其应用价值与现有的酶联免疫吸附(ELISA)法进行比较,为视神经脊髓炎(NMO)的诊断提供新的方法.方法 用RT-PCR法从小鼠小脑皮质中克隆AQP4基因,将其连入质粒pcDNA3.1,构建AQP4真核表达载体pcDNA3.1 -AQP4；用脂质体转染法将重组质粒转染HEK293细胞,G418筛选稳定表达细胞株；RTPCR和间接免疫荧光法(IFA)检测AQP4基因的表达情况；以稳定细胞株为底物用IFA法检测81例患者血清抗AQP4抗体,并与ELISA检测方法进行比较.结果 琼脂糖电泳显示RT-PCR扩增出993 bp的条带；与载体连接后得到酶切正确的重组质粒；RT-PCR扩增出一条与目的基因一致的条带；IFA法检测转基因HEK293细胞,呈抗AQP4阳性.IFA法检测患者血清中AQP4抗体的敏感性为93.3％,特异性为97.4％,正确指数为90.7％,与ELISA法一致性为96.3％.结论 成功克隆并构建小鼠AQP4基因真核表达载体,成功建立稳定表达AQP4的HEK293细胞株,该细胞株对NMO具有良好的检测效果,有望在NMO的临床诊断中发挥重要作用.

关键词：水通道蛋白-4、HEK293细胞株、视神经脊髓炎、间接免疫荧光法、酶联免疫吸附法

所属期刊栏目：31

分类号：R74(神经病学与精神病学)

在线出版日期：2011-12-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：3335-3337