小干扰RNA抑制成纤维细胞激活蛋白3的表达对肺癌干细胞增殖和侵袭的影响

摘要：

目的:探讨小干扰RNA(siRNA)抑制成纤维细胞激活蛋白3(fibroblast activation protein 3,FAP3)基因表达对肺癌干细胞增殖和侵袭的影响.方法:采用流式细胞术从肺癌细胞株A549中分选出CD44+/CD133+的肺癌的肿瘤干细胞(cancer stem cells.CSCs).将肺癌CSCs分为3组:空白对照组(不转染任何质粒)、siRNA-FAP组(转染靶向沉默FAP3表达的siRNA质粒)、阴性对照组(转染包含随机序列的siRNA质粒).采用MTT比色法检测靶向FAP3表达的siRNA(siRNA-FAP3)转染12、24、48和72 h后对细胞增殖的影响；采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和蛋白质印迹法(Western blot)分别检测转染72 h后细胞株中FAP3、Ki67的mRNA和蛋白质的表达情况；采用软琼脂克隆集落形成实验检测siRNA-FAP3对肺癌CSCs侵袭能力的影响.结果:转染48 h和72 h后,siRNA-FAP3组的细胞增殖抑制率[(24.67±1.08)％,(53.98±3.75)％]大于阴性对照组[(3.76±0.88)％,(4.53±1.01)％]及空白对照组[(2.34±0.41)％,(3.28±0.65)％],差异均有统计学意义(P分别＜0.05和0.01).转染72 h后,siRNA-FAP组细胞中FAP3和Ki67基因的mRNA表达水平(0.32±0.06,0.18±0.02)显著低于阴性对照组(1.03±0.12,0.99±0.17)和空白对照组(1.02±0.09,0.97±0.11),差异有统计学意义(P＜0.01).转染72 h后,siRNA-FAP组细胞中FAP3和Ki67蛋白表达水平(0.16±0.05,0.25±0.09)显著低于阴性对照组(0.49±0.26,0.47±0.13)和空白对照组(0.59±0.27,0.63±0.22),差异有统计学意义(P＜0.05).siRNA-FAP组细胞克隆形成率[(13.09±5.21)％]显著低于阴性对照组[(77.59±8.29)％]和空白对照组[(83.86±10.11)％],差异有统计学意义(P＜0.01).结论:转染siRNA可有效抑制肺癌CSCs中FAP3蛋白的表达,并且还可抑制CSCs的体外增殖和侵袭能力.

关键词：小干扰RNA、成纤维细胞激活蛋白3、肺癌干细胞、增殖、侵袭

所属期刊栏目：20

分类号：R734.2(肿瘤学)

资助基金：上海市科委医学引导基金项目10411967100

在线出版日期：2013-05-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：5-7