小干扰RNA抑制人端粒酶逆转录酶基因对恶性转化后骨髓间充质干细胞的影响

摘要：

目的:探讨小干扰RNA(siRNA)抑制人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT )表达对恶性转化后骨髓间充质干细胞(transformed mesenchymal stem cells,TMCs)增殖和在动物体内成瘤能力的影响.方法:构建针对hTERT的siRNA,通过脂质体转染的方法将hTERT-siRNA转染TMCs.实验组为3个浓度组,分别为50 nmol/L、100 nmol/L、200 nmol/L,设阴性对照组和空白对照组.用噻唑蓝(MTT)法检测siRNA对TMCs生长增殖的影响.用Western blot法检测各浓度组TMCs端粒酶的含量.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各浓度组hTERT mRNA含量,并用TRAP-ELISA法检测各浓度组TMCs端粒酶的活性.用BALA/C裸鼠体内实验检测siRNA转染后各组TMCs在动物体内成瘤能力的变化.结果:通过Western blot,发现不同浓度的hTERT-siRNA组TMCs的端粒酶蛋白含量逐渐减少,与siRNA的浓度呈负相关.50 nmol/L、100 nmol/L、200 nmol/L组分别下降了46.2%、69.5%、91.5%;MTT法检测3个浓度组hTERT-siRNA对细胞的生长抑制率分别为2.74%、7.26%、10.23%.其中50 nmol/L组和对照组之间差异无统计学意义,而100 nmol/L组和200 nmol/L组与阴性对照组之间差异有统计学意义.RT-PCR检测结果显示50 nmol/L、100 nmol/L、200 nmol/L hTERT-siRNA转染组hTERT基因分别下降了19.2%、47.2%、86.4%.端粒重复序列扩增(TRAP)-酶联免疫吸附试验(ELISA)法检查发现,不同浓度的hTERT-siRNA对TMCs的端粒酶活性都产生抑制作用,3组分别下降了11.0%、42.9%、86.2%.100 nmol/L组和对照组TMCs在裸鼠皮下形成肿瘤的时间相似,分别为14.8 d、14.2 d;200 nmol/L组成瘤时间较晚,为17.3 d.对照组形成的皮下肿瘤体积和质量分别为2.56 cm3、1.30 g;而100 nmol/L和200 nmol/L组肿瘤体积分别为0.64 cm3、0.31 cm3,质量分别为0.78 g、0.58 g,与对照组间相比差异有统计学意义.结论:siRNA可以下调hTERT基因的表达,减少TMCs细胞内端粒酶的含量,也降低了端粒酶的活性,从而增加了TMCs的凋亡、抑制了TMCs的生长,并降低了TMCs在裸鼠体内的成瘤能力.端粒酶在MSCs恶性转化的过程中可能起了重要的作用.

关键词：骨髓间充质干细胞、恶性转化、小干扰RNA、端粒酶逆转录酶

所属期刊栏目：18

分类号：Q522(核酸)

资助基金：国家重点基础研究发展"973"计划2005CB522604;上海市科委重点基金06dj14001

在线出版日期：2011-09-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：269-274