结肠癌患者血清中miR-186-5p表达的研究

摘要：

目的:探讨miR-186-5p在结肠癌中的表达及其对于结肠癌的影响,为结肠癌的治疗和预后治疗提供新的治疗靶点.方法:收集本院符合条件的病人血清样本,分为健康组、临床I、II、III、IV期5个组别(n=20),利用miRVana microRNA分离试剂盒提取病人血清中的miRNA,利用荧光实时定量PCR检测miR-186-5p在不同阶段结肠癌病人血清中表达的差异.将miR-186-5p的全长基因克隆到pENTR/D-Topo载体,构建miR-186-5p高表达的细胞系,利用miR-186-5p抑制剂,降低miR-186-5p表达.利用细胞增殖ELISA试剂盒,将5×103/孔的细胞接种到96孔板中,孵育24 h后加入BrdU标记24 h,在370和492 nm测定吸光度,测定miR-186-5p对肿瘤细胞增殖的影响.用MTT法检测miR-186-5p对结肠癌细胞系对化疗药物敏感性的影响.结果:结肠癌病人血清中miR-186-5p呈低表达状态,与正常组相比,临床I、II、III、IV期病人血清中miR-186-5p表达明显减少(P<0.01).利用质粒构建miR-186-5p高表达的细胞系,利用miR-186-5p抑制剂(hsa-miR-186-5p inhibitor)降低SW480、HCT116两种细胞内miR-186-5p的表达.与对照组相比,过表达miR-186-5p的HCT116细胞和SW480细胞增殖能力减弱,说明miR-186-5p表达增多抑制了HCT116细胞和SW480细胞的增殖.miR-186-5p抑制剂处理后,与对照组相比,HCT116细胞和SW480细胞的增殖能力均升高,说明miR-186-5p表达降低可以增加HCT116细胞和SW480细胞的增殖.不同浓度顺铂处理24 h后,高表达miR-186-5p的HCT116和SW480细胞死亡率均高于对照组(P<0.01),miR-186-5 p表达降低后,死亡率低于对照组(P<0.01).在miR-186-5p高表达的结肠癌细胞系中,PLK1蛋白表达降低,而抑制miR-186-5p表达后,PLK1蛋白表达升高.结论:结肠癌患者中miR-186-5p表达降低,过表达miR-186-5p可以抑制结肠癌细胞增殖生长,并降低结肠癌细胞的耐药性,抑制miR-186-5p表达可以增加结肠癌细胞增殖,并增强细胞的耐药性.

关键词：结肠癌、miR-186-5p、质粒、细胞增殖、顺铂

所属期刊栏目：25

分类号：R965.2;R735.3(药理学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81803614

在线出版日期：2020-11-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1097-1104