RNAi抑制DNA甲基转移酶1的表达对胃癌细胞p16基因的影响

摘要：

目的:运用RNAi(RNA interference)抑制胃癌细胞株BGC-823中DNA甲基转移酶1(DNA methylation transferase 1,DNMT1)基因的表达,当DNMT1基因沉默后观察p16基因的表达情况.方法:以DNMT1的mRNA核苷酸序列,构建siRNA质粒1、2、3和阴性对照siRNA质粒b,胃癌细胞培养后经脂质体转染.对DNMT1基因行Q-PCR检测其mRNA表达水平及Western blot检测其蛋白表达水平,确认其表达下调后筛选出最佳干扰质粒.以同样的方法检测胃癌细胞最佳干扰组、阴性对照组和空白对照组的p16基因的表达情况,以确认抑制DNMT1基因表达后对胃癌细胞p16基因的影响.结果:RNAi可有效抑制胃癌细胞株BGC-823中DNMT1基因的表达.对转染后的胃癌细胞DNMT1基因检测mRNA及蛋白表达情况,结果显示,转染siRNA2的胃癌细胞中DNMT1的表达明显低于其他转染组、阴性对照组及空白对照组(P＜0.05),由此筛选出最佳干扰质粒siRNA2.用同样的方法检测胃癌细胞最佳干扰组(siRNA2)、阴性对照组和空白对照组的p16基因表达情况.结果显示,最佳干扰组的mRNA(1.6727±0.2242)及蛋白(0.9227±0.0337)表达水平均高于阴性对照组(1.0025±0.0877)、(0.5440±0.0229)和空白对照组(0.4729±0.0940)、(0.4767±0.0774) (P＜0.05).结论:用RNAi可以抑制胃癌细胞DN-MT1基因的表达从而使p16基因去甲基化,使p16基因恢复表达.

关键词：胃癌、DNA甲基转移酶、RNA干扰、甲基化

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分类号：R965.2(药理学)

资助基金：安徽省科技攻关计划项目1604a0802098;芜湖市科技局科技惠民计划项目2014hm26

在线出版日期：2018-08-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：395-399