胃泌素调控ERK信号通路在促进大肠癌CACO2细胞增殖中的作用
目的:利用RNA干扰技术探讨ERK1/2基因在胃泌素促进大肠癌细胞株CAC02增殖中的作用及分子机制.方法:通过慢病毒感染细胞构建胃泌素受体(CCK-BR)阳性的细胞稳转株CA-CO2,应用qRT-PCR检测大肠癌细胞株CAC02中CCK-BR的表达情况.应用RNA干扰技术沉默ERK1/2基因后,分析其总的ERK基因的蛋白表达及其磷酸化水平变化.实验共分4组:对照组、阴性干扰组、胃泌素组及质粒干扰组.使用流式细胞仪Annexin V-FITC法检测各组细胞增殖指数及Western blot检测各组细胞ERK1/2蛋白的表达和磷酸化水平.结果:慢病毒感染后,在CAC02细胞中均检测到目的条带膜蛋白,CAC02细胞存在着一定量的CCK-BR mRNA表达,扩增产物为185 bp.筛选出干扰质粒,质粒与脂质体比例在1∶2,转染效率达到40％ ～ 50％,转染干扰质粒的细胞中ERK蛋白表达水平降低,从蛋白水平说明构建的质粒沉默有效.胃泌素组细胞增殖指数明显高于质粒干扰组,也高于阴性干扰组和空白对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).4组细胞间ERK1/2的蛋白表达及磷酸化水平比较,差异有统计学意义(P＜0.01).胃泌素组ERK1/2的蛋白表达及磷酸化水平明显高于质粒干扰组,也高于阴性干扰组和空白对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:胃泌素能够通过ERK信号通路促进体外大肠癌CAC02细胞增殖.通过RNA干扰技术有效地阻断ERK信号通路下调ERK蛋白磷酸化水平,有望为胃泌素依赖型大肠癌综合治疗寻找到一条新的切入途径.
胃泌素、ERK1/2、大肠癌、RNA干扰、慢病毒感染
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R965.2;R73-3(药理学)
安徽省自然科学基金资助项目1408085MH148;皖南医学院弋矾山医院人才引进基金YR201406
2017-06-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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