定量检测人超敏C-反应蛋白双抗体夹心ELISA方法的建立及初步临床应用

摘要：

目的:建立定量检测人超敏C-反应蛋白(CRP)双抗体夹心ELISA方法.方法:采用ProteinA亲和层析法纯化本室制备的抗CRP单克隆抗体(mAbs),并行SDS-PAGE和Western blotting对纯化抗体特性进行鉴定;利用简易过碘酸钠法对抗CRP mAbs进行标记HRP后行抗体配对实验:通过方阵滴定法确定包被抗体和酶标抗体的最适工作浓度;以纯化的CRP抗原为标准品建立标准曲线;以重复性、灵敏性和回收率实验评价ELISA方法.初步对人血浆中的超敏CRP水平进行检测.结果:最佳配对组合为抗CRP mAb 1C10和HRP标记的抗CRP mAb 2C11,最适工作浓度分别为10 μg/mL和1:2000,该方法的批内、批间变异系数分别为3.1%～9.7%和3.6%～13.6%,灵敏度达8.3 ng/mL,回收率为90%～109%.用EusA法测定左右冠无明显狭窄者68例,狭窄小于50%者59例和狭窄大于50%患者67例的血浆hs-CRP水平,冠脉狭窄小于50%组(3.7±1.2)mg/L与冠脉无狭窄组(1.8±0.7)mg/L比较明显升高(P<0.05);狭窄大于50%组(8.9±3.3)mg/L与狭窄小于50%组比较明显升高(P<0.05).结论:建立了一种可用于检测人超敏CRP的双抗体夹心ELISA方法.

关键词：定量检测、超敏C-反应蛋白、ELISA双抗体夹心法

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分类号：R969(药理学)

资助基金：重大疾病分子诊断和生物治疗的高技术平台基金XK200705

在线出版日期：2010-01-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：84-89