稳定高效表达人血栓调节蛋白的CHO细胞株的建立

摘要：

目的:构建稳定高效表达人血栓调节蛋白(human thrombomodulin,hTM)的CHO细胞株,以便于大量生产纯化hTM蛋白.方法:利用脂质体li-pofectamine 2000将包含hTM基因全长序列的重组表达质粒pThr402转染CHO细胞.转染后用G418的选择性培养液筛选、挑取抗性克隆.采用流式细胞术和Western b1otting检测hTM在CHO细胞膜表面的表达情况,筛选建立稳定高效表达hTM的CHO细胞株并对其稳定性进行观察.结果:重组表达质粒pThr402转染CHO细胞后,流式细胞术证实hTM稳定高效表达于随机挑选的5个抗性克隆细胞株的细胞膜表面,但表达量有差异.Western blotting分析检测显示hTM表达量较高的CHO-TMl、CHO-TM4与CHO-TM5细胞株的细胞裂解液出现了与预期值相符的约105000的特异性条带.CHO-TM5已经经过冻存复苏前后各20次传代,且无论有无G418选择压力存在,hTM表达水平无明显差异.结论:成功构建了稳定高效表达hTM的CHO细胞株,可望获得大量蛋白,为进一步研究hTM的生物学功能以及制备和筛选抗hTM的单抗开辟新的途径.

关键词：人血栓调节蛋白、CHO细胞、稳定转染、表达

所属期刊栏目：13

分类号：Q78;Q812(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金30770868;湖南省衡阳市科技厅项目2008KJ005

在线出版日期：2009-04-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1214-1219